藥用塑料瓶細(xì)胞毒性檢查法系將供試品或供試品液接觸細(xì)胞，通過(guò)對(duì)細(xì)胞形態(tài)、增殖和抑制影響的觀察，評(píng)價(jià)供試品對(duì)外細(xì)胞的毒性作用。

藥用HDPE瓶

試驗(yàn)用細(xì)胞 推薦使用小鼠成纖維細(xì)胞L-929。試驗(yàn)時(shí)采用傳代48~72h生長(zhǎng)旺盛的細(xì)胞。

試驗(yàn)前的準(zhǔn)備 與樣品及細(xì)胞接觸的所有器具均需無(wú)菌。必要時(shí)可采用濕熱滅菌和115°C保持30分鐘；干熱滅菌如250度保持30分鐘或用180度保持2h。

供試品液的制備 提取介質(zhì)的選擇宜反映出提取的目的，優(yōu)先選用含血清哺乳動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)基礎(chǔ)作為提取介質(zhì)。除另有規(guī)定外，按品種項(xiàng)下規(guī)定的提取介質(zhì)制成供試品液。將供試品切成0.5cmX2cm條狀，用濕熱滅菌或紫外線照射消毒后，置玻璃容器內(nèi)。除另有規(guī)定外，按表1選擇提取比例，使提取液浸沒(méi)供試品，按表2選擇提取條件（若采用含血清培養(yǎng)基，應(yīng)用（37±1）度的條件）。

1、相對(duì)增殖度法

陰性對(duì)照液制備 為不加供試品的細(xì)胞培養(yǎng)液。

陽(yáng)性対照液制備 取生物毒性參比物質(zhì)，照供試品制備項(xiàng)下的規(guī)定進(jìn)行，如6.3%苯酚的細(xì)胞培養(yǎng)液。

檢查法 取33個(gè)培養(yǎng)瓶，分別加入4X10⁴個(gè)/ml濃度細(xì)胞懸液1ml，細(xì)胞培養(yǎng)液4ml，置（37±1）度，（5±1）%CO₂條件下培養(yǎng)24h。培養(yǎng)24好后棄原培養(yǎng)液。

陰性對(duì)照組：取13個(gè)培養(yǎng)瓶加入5ml含50%供試品液的細(xì)胞培養(yǎng)液，置（37±1）度，（5±1）%CO₂的條件下繼續(xù)培養(yǎng)7天。

細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察和計(jì)數(shù)；在更換細(xì)胞培養(yǎng)液的當(dāng)天，取3瓶陰性對(duì)照組，并在更換后第2、4、7天，每組各取3瓶進(jìn)行細(xì)胞形態(tài)觀察和細(xì)胞計(jì)數(shù)。

毒性評(píng)定 細(xì)胞形態(tài)分析標(biāo)準(zhǔn)按表3規(guī)定

根據(jù)各組織細(xì)胞濃度按下式計(jì)算細(xì)胞相對(duì)增殖度（RGR）：

結(jié)果評(píng)價(jià)  試驗(yàn)組相對(duì)增殖度（以第7天的細(xì)胞濃度計(jì)算）為0級(jí)或1級(jí)判為合格。試驗(yàn)組相對(duì)增殖度為2級(jí)，應(yīng)結(jié)合形態(tài)綜合評(píng)價(jià)，輕微毒或無(wú)毒的判為合格。試驗(yàn)組相對(duì)增殖度為3級(jí)~5級(jí)判為不合格。