新修訂藥用塑料瓶細胞毒性檢查法直接接觸法如下:
供試品制備 采用供試品的平整部分,表面積不小于100mm2。
陽性對照制備 取生物毒性陽性參比物質,照供試品制備項下的規定進行
陰性對照制備 取高密度聚乙烯參比物質,照供試品制備項下的規定進行
檢查法 取生長旺盛的細胞懸浮液(1x105個/ml)2ml,置直徑35mm的平皿中培養單層細胞。置于細胞培養箱中培養24h至近匯合單層細胞,吸去培養基,替換為0.8ml的新鮮培養基。
在每個培養皿中單獨放置1個供試品、陽性對照或陰性對照,每個試樣至少設置2個平行。將所有的培養物置(37±1)度含(5±1)%CO2的細胞培養箱中至少24h,培養箱宜保持適當的濕度。顯微鏡下觀察每個供試品、陰性對照、陽性對照周圍,必要時應進行染色。
結果評價 按照瓊脂擴散法結果評價項下的規定進行。若樣品不超過2級(輕微毒),則樣品判為合格。若實驗系統無效需要重復試驗過程。